許多實驗涉及蛋白質的鑒定(例如探究特定酶的作用模式),只有在相關的蛋白質可以從細胞內許多其他蛋白質中分離出來后才有可能成功。得到均一的蛋白質溶液或者蛋白質復合物也是其他分析過程的先決條件,例如序列分析、蛋白質...[繼續閱讀]

    獲得蛋白質的原料多種多樣。簡單的情況是所需要的蛋白質已經存在于溶液中(例如血液、牛乳或者細胞培養物的上清液),純化可以直接開始。然而,在多數情況下,含有蛋白質的抽提物需要從起始材料制備。在過去,動物和植物細胞常...[繼續閱讀]

    7.3.1電泳原理蛋白質在水溶液中,除了在等電點之外的所有pH下,均帶有一定的電荷。因此它們可以在電場中遷移。遷移的比速率v與每分子所帶電荷數成正比,與粒子的Stokes半徑和介質的黏度成反比:v=z/(6πηr)。凝膠電泳分離蛋白比在游...[繼續閱讀]

    這些技術追溯到早期的蛋白質純化。在過去,通過改變蛋白的溶解性沉淀蛋白常常是唯一的可以使用的富集方法?，F在,富集經常是通過疏水相互作用色譜來獲得(參見7.5)。蛋白質的溶解性主要取決于蛋白表面親水和疏水區域的分布。...[繼續閱讀]

    7.5.1分離的一般規律本節中提到的分離規律可以用于純化所有種類的蛋白質。它們的大多數基于蛋白質對于凝膠基質的特定吸附,以及接下來進行的以含有線性的或者逐步分級的濃度梯度的特定緩沖液洗脫。使用吸附技術非常流行并...[繼續閱讀]

    7.6.1例1:從牛視網膜桿細胞胞漿中純化核苷二磷酸激酶核苷二磷酸激酶(NDPK)在自然界普遍存在,主要是胞漿蛋白,能夠從5′-核苷三磷酸(NTPs)轉移第三位高能磷酸殘基到核苷二磷酸(NDPs)上。因此它們是細胞中從ATP和NDPs合成其他NTPs所必需...[繼續閱讀]

    Deutscher,M.P.(ed.)1990,MethodsinEnzymology,vol.182,GuidetoProteinPurification,AcademicPress,SanDiego.Janson,J.C.,Ryden,L.1998,ProteinPurification,Principles,HighResolutionMethodsandApplications,2ndedn,Wiley-VCH,Weinheim.Scopes,R.K.1994,ProteinPurificatio...[繼續閱讀]

    質譜是儀器分子分析的高靈敏度技術,它發明于約90年前。物理學家湯姆森和阿斯頓在英格蘭劍橋開發了該技術,最初用于元素分析。在20世紀50年代質譜擴展到有機化學?，F今,有很多類型的質譜專門用于分析元素、小的氣體分子,或者...[繼續閱讀]

    質譜儀由三個功能單元組成:離子源、質量分析器和檢測器。對于質譜分析而言,游離氣體離子產生于在離子源中的樣品,然后在高真空中聚焦成離子束。質量分析器根據粒子束中離子的質荷比(m/z)將離子分離,這些離子被檢測器記錄。...[繼續閱讀]

    每一個質譜圖都需要用標準物質校正,以保證精確的質量確定(外標法)。更精確的數據可以用被稱為內標法的方法獲取,該法在記錄的圖譜中包括已知質核比的峰。在樣品中已經存在的來自分析物的信號(例如已知的污染物)可以用作參...[繼續閱讀]